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      PUREfrex®1.0無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒組分及使用方法
      
        
      更新時(shí)間：2025-04-28      點(diǎn)擊次數(shù)：225次
      
        
      PUREfrex®1.0于2011年推出，是基于PURE system開發(fā)的無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒，由轉(zhuǎn)錄、翻譯、能量再生所需的蛋白和核糖體組成。        
      PUREfrex®使用流程.png
      圖2.PUREfrex®使用流程
       
      PUREfrex®1.0使用方法（僅供參考）：
      以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對(duì)應(yīng)試劑。
      1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解，然后在冰上冷卻。
      2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
      3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡(jiǎn)短離心收集管底內(nèi)容物。
      4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
      Water
      8-X μL
      Solution I
      10μL
      Solution II
      1μL
      Solution III
      1μL
      Template DNA
      X μL
      總體積
      20ul
      5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。
      6. 分析合成蛋白。通過(guò)SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí)，請(qǐng)用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。
      試劑盒組分1.0.png
      試劑盒組分：
      組分名稱
      組分內(nèi)容
      保存溫度
      Solution I
      Amino acids,   NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.
      -20℃
      Solution II
      Proteins in 30 %   glycerol buffer
      -20℃/-80℃
      Solution III
      Ribosome (20 μM)
      -80℃
      DHFR DNA
      PCR product   containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a   positive control. (20 ng/μL)
      -20℃
      請(qǐng)注意：1.在打開試劑盒之前請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。
       
      產(chǎn)品信息：
      貨號(hào)
      名稱
      規(guī)格
      GFK-PF001-0.25-EX
       
      PUREfrex®1.0
      1 x 250 µl
      GFK-PF001-2ML-EX
      2 ml
      GFK-PF001-10ML-EX
      5 x 2 ml
       
      除了以上目錄產(chǎn)品外，Cosmo Bio也能根據(jù)客戶的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公開的，您可以根據(jù)PUREfrex®1.0設(shè)計(jì)定制試劑盒。
       
      PUREfrex®1.0組分
      PUREfrex®1.0 Solution I   (Buffer, Salts, Substrates)組分
      Hepes-KOH pH 7.6
      Potassium glutamate
      Magnesium acetate
      Spermidine
      Dithiothreitol
      10-Formyl-tetrahydrofolate
      4 NTPs
      20 Amino acids
      Creatine phoshate
      tRNA mixture
       
      PUREfrex®1.0 Solution II   (Proteins)組分
      20 Aminoacyl-tRNA   synthetases (ARS)
      Methionyl-tRNA   transformylase (MTF)
      3 Initiation factors (IF1,   IF2, IF3)
      3 Elongation factors (EF-Tu,   EF-Ts, EF-G)
      3 Release factors (RF1, RF2,   RF3)
      Ribosome recycling factor   (RRF)
      T7 RNA polymerase
      Nucleoside diphosphate   kinase (NDK)
      Adenylate kinase (ADK,   myokinase)
      Ceatine kinase (CK)
      Pyrophosphatase (PPiase)
       
      PUREfrex®1.0   Solution III組分
      Ribosome
       
      定制應(yīng)用舉例
      （-）RF1
      用于通過(guò)如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)。
      （-）T7 RNA polymerase
      可用于檢測(cè)其他RNA聚合酶性能，如大腸桿菌RNA聚合酶。
      （-）特異性氨基酸和（或）20種氨酰tRNA合成酶
      用于合成含非天然氨基酸或少于20個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。
       
      琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖.png
      圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖
       
      當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí)，只需向PUREfrex®1.0中添加補(bǔ)充試劑即可。
       
      分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)
      產(chǎn)品貨號(hào)
      產(chǎn)品名稱
      規(guī)格
      GFK-PF003-0.5-EX
      DnaK Mix
      500 µl Equivalents
      GFK-PF003-10ML-EX
      DnaK Mix
      5 x 2 ml Equivalents
      GFK-PF004-0.5-EX
      GroE Mix
      500 µl Equivalents
      GFK-PF004-10ML-EX
      GroE Mix
      5 x 2 ml Equivalents
       
      幫助形成二硫鍵的添加物
      產(chǎn)品貨號(hào)
      產(chǎn)品名稱
      規(guī)格
      GFK-PF005-0.5-EX
      DsbC Set
      500 µl Equivalents
      GFK-PF005-10ML-EX
      DsbC Set
      5 x 2 ml Equivalents
      GFK-PF006-0.5-EX
      PDI Set
      500 µl Equivalents
      GFK-PF006-10ML-EX
      PDI Set
      5 x 2 ml Equivalents
       
       

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