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      什么是CUT&Tag技術?

      更新時間:2023-04-07   點擊次數(shù):925次

      近年基因組學和表觀遺傳學領域引入了兩種新方法:

      核酸酶靶向切割和釋放技術(CUT&RUN)

      靶向剪切及轉(zhuǎn)座酶技術(CUT&Tag)

      什么是CUT&Tag技術?


      CUT&RUN和CUT&Tag檢測法正在取代ChIP-seq

      簡化的工作流程跳過了ChIP-seq實驗法中的挑戰(zhàn)性步驟,包括染色質(zhì)片段化和抗體pull down,用更少的細胞和測序讀數(shù)得到更佳的數(shù)據(jù)。

      具體變現(xiàn)為:

      1.低細胞需求量;

      2.高吞吐量;

      3.操作流程更簡易;

      4.低成本,測序讀取次數(shù)更少;

      5.數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠,重復性好


      EpiCypher CUT&Tag:

      孵育結(jié)合好特異性抗體與靶標蛋白后,加入蛋白 A、蛋白G與Tn5的復合物(pAG-Tn5),使得轉(zhuǎn)座體進入細胞并與抗體結(jié)合,間接地固定在靶蛋白上;激活Tn5酶的切割活性,將靶蛋白結(jié)合的DNA區(qū)域切斷,從而達到提取DNA、進行PCR擴增、構(gòu)建文庫的目的。在Tn5上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域的轉(zhuǎn)座體pAG-Tn5是關鍵的進步,因為這一步允許研究者不必碎裂染色質(zhì)以及進行傳統(tǒng)的庫準備步驟。



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